cicRNA測序

樣本類型

樣本要求

保存及運輸條件

說明內容

新鮮組織

新鮮組織標本（腫瘤樣本在術后30分鐘內取得）≥50 mg（黃豆粒大小）可采用以下方法：

1.RNAlater：尤其適用于腫瘤組織，離體后于冰上快速切成小塊，組織塊直徑最好介于1-5 mm（小米至綠豆大?。菰?倍體積的RNAlater中，充分浸潤（最好4℃過夜，以保證浸潤效果），-80℃保存；如果是腫瘤樣本，應盡可能準確地判定腫瘤組織和正常組織。

2.TRIzol：在冰上快速分成小塊，組織塊直徑最好不大于5 mm（綠豆大?。┙萦赥RIzol中，凍存管或者離心管封口膜封好后送樣。

3.液氮：離體后液氮速凍充分，預冷凍存管，將組織轉移至凍存管中，液氮可長期保存。

干冰運輸

建議樣本備份1-2份，收樣后立即提取。

細胞

提取mRNA需細胞數量＞5×10⁶個，lncRNA需＞1×10⁷個。

1.懸浮細胞收集用PBS緩沖液快速洗一次，每5×10⁶個細胞加入1 mL TRIzol，用移液器吹散，溶液呈清亮不粘稠狀；-80℃保存不超過1個月；

2.貼壁細胞需將培養(yǎng)基盡量吸棄；按每10 cm²培養(yǎng)面積（相當于六孔板一個孔或35 mm直徑培養(yǎng)皿）加1 mL TRIzol；移液器反復吹打，使TRIzol完全接觸長有細胞的培養(yǎng)瓶表面，充分消化；轉移到RNase-free的離心管中，用一次性注射器反復吹打細胞直至看不見成團的細胞塊，整個溶液呈清亮不粘稠狀，-80℃保存

干冰運輸

建議樣本備份1-2份，收樣后立即提取。

外周血（RNA）

1.TRIzol：15 mL管中加入6 mL TRIzol和2 mL新鮮血液（TRIzol：血液=3：1），移液器吹打以幫助裂解樣品中的細胞；樣品劇烈震蕩混勻1-2 min，直到絮狀物全部溶解；室溫孵育5 min使核蛋白體完全分解；封口膜封存，-80℃凍存。注意：冰凍血液溶解過程中會有破碎的細胞釋放RNA酶，因此建議在冰凍前加入TRIzol，切勿直接凍存新鮮血液，保存好的血液應避免反復凍融。離心得到白細胞或有核細胞，可加TRIzol，-80℃保存，干冰運輸。

2.BD PAXgene Blood RNA Tube：人類血液樣本推薦使用，采集量為2mL左右，18-25℃可保存3天，2-8℃可保存5天，-20℃或-70℃至少可穩(wěn)定50個月。

3.使用RNAlock血液RNA穩(wěn)定劑保存，新鮮抗凝血液：血液RNA穩(wěn)定劑=1：3，蓋上管蓋，上下顛倒混勻8-10次。室溫放置2h以上后低溫保存；含有血液RNA穩(wěn)定劑的人血液樣品可在2-8℃保存5天，或在-20℃條件下至少保存三個月；含有血液RNA穩(wěn)定劑的哺乳動物血液樣品可在15-25℃保存2天，2-8℃保存7天，或在-20℃條件下至少保存六個月。

TRIzol保存法需干冰運輸；BD PAXgene Blood RNA Tube 保存法可使用足量冰袋，用泡沫箱運輸

Total

RNA

總RNA溶解于DEPC水或者RNase-free的緩沖液中?？偭?ge;2 μg；純度OD_260/280≥2.0；完整性RIN≥8.0；濃度≥100 ng/μL。

使用1.5 mL或2 mL離心管盛放，用parafilm封口膜密封，然后將樣本管置于保護用的50 mL離心管或其他類似容器里，并旋緊蓋子。使用足量冰袋，用泡沫箱運輸。